拉萨市人民代表大会议事规则（2004年修正）
西藏自治区拉萨市人大常委会
拉萨市人民代表大会议事规则（2004年修正本）
（1989年6月16日拉萨市第五届人民代表大会第三次会议通过 2004年4月19日拉萨市第八届人民代表大会第三次会议修订 2004年6月9日西藏自治区第八届人民代表大会常务委员会第十二次会议批准 2004年6月9日西藏自治区人民代表大会常务委员会公告[2004]第14号公布 自公布之日起施行）
第一章 总则
第一条 为了保障拉萨市人民代表大会依法行使职权，提高工作效率，根据《中华人民共和国地方各级人民代表大会和地方各级人民政府组织法》的规定，结合拉萨市人民代表大会工作实际，制定本规则。
第二条 市人民代表大会会议审议议案，决定事项，进行选举、罢免、任命，应当充分发扬民主，实行民主集中制的原则。
第三条 市人民代表大会举行会议时，同时使用藏语言文字和国家通用语言文字或者其中一种语言文字。
第二章 会议的准备
第四条 市人民代表大会会议每年至少举行一次，一般于每年的3－4月份举行。
市人民代表大会常务委员会（以下简称市人大常委会）认为有必要，或者有五分之一以上的市人民代表大会代表提议，可以临时召开市人民代表大会会议。
第五条 市人民代表大会会议由市人大常委会召集。每届市人民代表大会第一次会议，在本届市人民代表大会代表选举完成的两个月内，由上届市人大常委会召集。
第六条 市人民代表大会会议有三分之二以上的代表出席，始得举行。
市人民代表大会举行会议时，代表除因病或者其他特殊原因确需请假者外，应当出席会议。未经批准两次不出席市人民代表大会会议的，其代表资格终止。
第七条 市人民代表大会会议举行前，市人大常委会做好下列准备工作：
（一）决定会议召开的日期；
（二）提出会议议程草案；
（三）提出主席团和秘书长名单草案；
（四）决定列席会议人员名单；
（五）确认新选出的市人民代表大会代表的资格；
（六）准备会议审议的议案和有关报告；
（七）会议的其他准备事项。
第八条 市人大常委会应当在市人民代表大会举行的一个月前，将开会日期和建议会议讨论的主要事项通知代表，并将准备提请会议审议的法规草案发给代表。
临时召集的会议，可以临时通知。
第九条 市人民代表大会会议举行前，按照选举单位组成代表团。市人大常委会主任会议决定各代表团预备会议召集人，召集会议推选各代表团团长、副团长。团长召集并主持代表团全体会议，副团长协助团长工作。
各代表团审议市人大常委会提出的主席团和秘书长名单草案、会议议程草案以及会议的其他事项，如有不同意见，由市人大常委会主任会议提出相应的调整意见，提请预备会议审议。
第十条 市人民代表大会会议举行前，召开预备会议，选举主席团和秘书长，通过会议议程和其他事项。预备会议由市人大常委会主持。每届市人民代表大会第一次会议的预备会议，由上届市人大常委会主持。
第三章 会议的举行
第十一条 市人民代表大会会议由主席团主持。主席团第一次会议由市人大常委会主任召集，主任因故不能出席，可以委托副主任召集。每届市人民代表大会第一次会议主席团第一次会议，由上届市人大常委会主任或本次大会秘书长召集。
第十二条 主席团会议必须有三分之二以上的主席团成员出席始得举行。主席团决定问题，由主席团全体成员的过半数通过。
第十三条 主席团职责：
（一）主持市人民代表大会会议；
（二）向大会提出议案和各项决议草案；
（三）组织审议列入会议议程的议案和有关报告；
（四）依法提出本级国家机关领导人员的人选；
（五）主持大会选举，提出选举的具体办法草案；
（六）决定议案、罢免案、质询案的审议程序和提出处理意见；
（七）发布公告；
（八）其他需要由主席团决定的事项。
第十四条 主席团第一次会议的议程：
（一）推选主席团常务主席；
（二）推选代表大会各次全体会议的执行主席；
（三）决定副秘书长的人选；
（四）决定会议日程；
（五）决定表决议案的办法；
（六）决定代表提出议案的截止日期；
（七）其他需要由主席团第一次会议决定的事项。
第十五条 主席团常务主席召集并主持主席团会议。
主席团常务主席可以就主席团职权范围内的事项向主席团提出建议；可以召开代表团团长会议，听取各代表团审议有关议案的意见，提出建议，向主席团报告；可以就重大的专门性问题，召集有关代表进行讨论；可以对会议日程提出调整意见。
第十六条 市人民代表大会的议案和有关报告，由各代表团会议审议。必要时，由主席团召开大会全体会议进行大会发言，就议案和有关报告发表意见。
以代表团名义提出的议案、质询案、罢免案，由代表团全体代表的过半数通过。
第十七条 市人民代表大会会议设立大会秘书处。秘书处由大会秘书长和副秘书长组成。
秘书处办理主席团交付的事项和处理会议的日常事务。根据需要，秘书处可以设立若干工作小组，办理具体工作。
第十八条 不是市人民代表大会代表的市人民政府组成人员和市中级人民法院院长、市人民检察院检察长列席市人民代表大会会议；其他有关机关、团体的负责人，根据需要，经市人大常委会决定，可以列席会议。
列席会议的人员有发言权，没有表决权。
大会全体会议可以设旁听席。旁听办法由大会秘书处规定。
市人民代表大会会议通过的文件和有关事项依法公布；必要时也可举行新闻发布会。
第四章 议案的提出和审议
第十九条 市人民代表大会举行会议的时候，主席团、市人大常委会、市人大各专门委员会、市人民政府可以向大会提出属于市人民代表大会职权范围内的议案，由主席团决定列入会议议程。
一个代表团或者十人以上代表联名，可以向市人民代表大会提出属于市人民代表大会职权范围内的议案，由大会秘书处汇总后向主席团提出议案处理意见，由主席团决定是否列入会议议程，或者先交有关的专门委员会审议并提出意见，再由主席团决定是否列入会议议程。主席团决定不列入会议议程的议案，应当向大会报告或者向提案人作说明。
代表团或者代表联名提出的议案，应当在市人民代表大会主席团决定的代表提出议案的截止日期之前提出，在提出议案的截止日期之后提出的，作为建议、批评和意见处理。
第二十条 列入会议议程的议案，提案人应当向大会作议案的说明，并提供有关的资料。议案由主席团交各代表团进行审议，或交有关专门委员会进行审议、提出报告，由主席团审议决定提交大会全体会议表决。
在审议中有重大问题需要进一步研究的，经主席团提出，由大会全体会议决定，可以授权市人大常委会审议决定，并报市人民代表大会下次会议备案或者提请重新审议。
列入会议议程的议案，在交付表决前，提案人要求撤回的，经主席团同意，并向大会报告，会议对该议案的审议即行终止。
第二十一条 列入市人民代表大会议程的法规案，大会全体会议听取提案人的说明后，由各代表团进行审议，并由有关的专门委员会进行审议，向主席团提出审议意见。法制委员会根据各代表团和有关专门委员会的审议意见，对法规案进行统一审议，向主席团提出修改情况报告和法规草案修改稿，对重要的不同意见应当在修改意见中予以说明，经主席团审议通过后，印发大会。
法规草案修改稿经各代表团审议后，由法制委员会根据各代表团的审议意见进行修改，提出审议结果报告和法规草案表决稿，由大会主席团提请大会全体会议表决，由全体代表的过半数通过。
市人民代表大会制定的地方性法规报经自治区人民代表大会常务委员会批准后，由市人大常委会发布公告予以公布。
第二十二条 会议期间代表提出的对各方面工作的建议、批评和意见，由大会秘书处提出处理意见，送交有关机关和组织研究处理并负责答复。凡能够在会议期间处理的，应当及时处理，并尽可能在会议期间答复代表；会议期间处理确有困难的，大会闭会后的三个月内，至迟不超过六个月处理完毕并答复代表。代表对答复不满意的可以提出意见，由市人大常委会办事机构交由有关机关、组织或者其上级机关再作研究处理并负责答复。
第五章 审议工作报告、审查计划和财政预算
第二十三条 市人民代表大会举行会议的时候，市人大常委会、市人民政府、市中级人民法院、市人民检察院应当分别向会议提出工作报告，经各代表团审议后，会议可以作出相应的决议。决议草案经各代表团审议后，由主席团提交大会全体会议表决。
第二十四条 市人民代表大会会议举行的一个月前，市人民政府有关主管部门应当就全市国民经济和社会发展计划及执行情况、财政预算及预算执行情况，向市人大财政经济委员会汇报，由财政经济委员会进行初步审查。
第二十五条 市人民代表大会举行会议的时候，市人民政府向会议提出的全市国民经济和社会发展计划及计划执行情况的报告、全市财政预算及预算执行情况的报告，包括国民经济和社会发展计划主要指标（草案）、财政预算收支和执行情况表（草案）一并印发会议，由各代表团审议、财政经济委员会审查，由财政经济委员会向主席团提出审查结果报告，经主席团会议审议通过后，印发会议并将全市国民经济和社会发展计划及计划执行情况的报告、全市财政预算及预算执行情况的报告的决议草案提交大会全体会议表决。
第二十六条 国民经济和社会发展计划、财政预算经市人民代表大会批准后在执行过程中必须作部分调整的，市人民政府应当将调整方案提请市人大常委会审查和批准。
第六章 国家机构组成人员的选举、辞职和罢免
第二十七条 市人大常委会组成人员，市人民政府市长、副市长及市中级人民法院院长，市人民检察院检察长，市人大各专门委员会组成人员的人选，由大会主席团提名，市人民代表大会代表二十人以上书面联名，也可以提名。市人大常委会组成人员、市人大各专门委员会组成人员，必须在市人民代表大会代表中提名。
自治区人民代表大会的代表候选人，由各政党、人民团体联合或者单独推荐代表候选人，代表十人以上联名，也可以推荐代表候选人。提名、酝酿候选人的时间不得少于两天。
第二十八条 提出候选人的提名人应当向会议介绍候选人的基本情况和提名理由，并对代表提出的问题作必要的说明。
第二十九条 市人民代表大会会议选举采用无记名投票方式。选举的具体办法由大会全体会议通过。
选举结果，由会议主持人当场宣布，并应当公布候选人得票数。得票数超过全体代表半数的，始得当选。
选出的市人民检察院检察长，须报经自治区人民检察院检察长提请自治区人民代表大会常务委员会批准。
第三十条 市人民代表大会会议期间，市人大常委会组成人员，市人民政府市长、副市长，市中级人民法院院长和市人民检察院检察长，市人大各专门委员会组成人员提出辞职的，由主席团将其辞职请求交给各代表团审议后，提请大会全体会议决定。市人民代表大会闭会期间提出辞职的，由主任会议将其辞职请求提请市人大常委会审议决定。常委会决定接受辞职的应当报市人民代表大会下次会议备案。市人民检察院检察长的辞职，须报经自治区人民检察院检察长提请自治区人民代表大会常务委员会批准。
市人民代表大会闭会期间，市人民政府市长、市中级人民法院院长、市人民检察院检察长缺位的，市人大常委会可以分别在市人民政府副市长、市中级人民法院副院长、市人民检察院副检察长中决定代理人选。决定代理检察长须报自治区人民检察院和自治区人民代表大会常务委员会备案。
第三十一条 市人民代表大会举行会议的时候，主席团、市人大常委会或者十分之一以上代表联名，可以提出对市人大常委会组成人员，市人民政府市长、副市长，市中级人民法院院长和市人民检察院检察长的罢免案，由主席团交各代表团审议后，提请大会全体会议表决；或者由主席团提出建议，经大会全体会议决定，组织调查委员会，由市人民代表大会下次会议根据调查委员会的报告审议决定。罢免市人民检察院检察长，须报经自治区人民检察院检察长提请自治区人民代表大会常务委员会批准。
罢免案应当写明罢免理由，并提供有关的材料。
罢免案表决前，被提出罢免的人员有权在主席团会议和大会全体会议上提出申辩意见，由主席团印发会议。
第三十二条 市人大常委会组成人员、市人大各专门委员会组成人员的市人民代表大会代表职务被原选举单位罢免的，或其代表资格终止的，其市人大常委会组成人员、市人大各专门委员会组成人员职务相应撤销或免除，由主席团或者市人大常委会予以公告。
第七章 询问、质询和调查委员会
第三十三条 各代表团审议议案和有关报告的时候，有关机关应当派负责人到会，听取意见，回答代表提出的询问。
主席团和市人大各专门委员会审议议案和有关报告的时候，市人民政府或者有关机关负责人应当到会，听取意见，回答询问，并可以对议案或者有关报告作补充说明。
第三十四条 市人民代表大会会议期间，一个代表团或者代表十人以上联名的，可以书面提出对市人民政府和它所属各工作部门以及市中级人民法院、市人民检察院的质询案。
质询案必须写明质询对象、质询的问题和内容。
第三十五条 质询案由主席团决定交由受质询机关在主席团会议、大会全体会议或者有关的专门委员会会议上口头答复，或者书面答复。在主席团会议或者有关的专门委员会会议上答复的，提质询案的代表有权列席会议，发表意见；主席团认为必要的时候，可以将答复质询案的情况报告印发会议。
质询案以口头答复的，应当由受质询机关的负责人到会答复；质询案以书面答复的，应当由受质询机关的负责人签署，由主席团印发会议或者印发提质询案的代表。
提质询案的代表团或者代表对质询案的答复不满意的，可以提出要求，经主席团决定，由受质询机关再作答复。
第三十六条 主席团或者十分之一以上代表书面联名，可以向市人民代表大会提议组织关于特定问题的调查委员会，由主席团提请大会全体会议决定。
调查委员会由主任委员、副主任委员和委员若干人组成，由主席团在代表中提名，提请大会全体会议通过。必要时调查委员会可以聘请有关人员参加调查工作。
第三十七条 调查委员会进行调查的时候，有关的国家机关、社会团体和公民都有义务如实提供必要的材料。对涉及国家秘密和个人隐私的材料，调查委员会应当保守秘密。
第三十八条 调查工作完成后，由调查委员会向市人民代表大会提出调查报告，市人民代表大会根据调查委员会的报告，可以作出相应的决议；市人民代表大会可以授权市人大常委会在代表大会闭会期间，听取调查委员会的调查报告，并可以作出相应的决议，报市人民代表大会下次会议备案。
第八章 发言和表决
第三十九条 市人民代表大会代表可以在大会各种会议上发言。
要求在大会全体会议上发言的，应当事先向大会秘书处报名，经主席团常务主席同意，由大会执行主席安排；在大会全体会议上临时要求发言的，经大会执行主席许可，始得发言。
第四十条 会议表决议案采用投票方式、举手方式或者其他方式，由主席团决定。
第四十一条 大会全体会议表决议案，由全体代表的过半数通过。
表决结果由会议主持人当场宣布。
第四十二条 市人民代表大会代表在市人民代表大会各种会议上的发言和表决，不受法律追究。
第九章 附则
第四十三条 本规则由市人大常委会负责解释。
第四十四条 本规则自公布之日起施行。
关于印发《SARS病毒灭活疫苗临床前研究技术要点》等技术要求的通知
国家食品药品监督管理局
关于印发《SARS病毒灭活疫苗临床前研究技术要点》等技术要求的通知
国食药监注[2003]128号
各省、自治区、直辖市药品监督管理局：
为加强SARS诊断试剂、疫苗以及防治药物筛选研发工作的管理，规范技术研究及实验方法，确保研究结果真实可靠，我局组织制定了《SARS病毒灭活疫苗临床前研究技术要点》、《细胞模型筛选抗SARS病毒药物试验技术要求》、《SARS诊断试剂生产研制技术要求》及《SARS病毒毒株资料登记表》等技术要求，现予印发，请从事SARS防治药物研发的单位遵照执行，并就相关问题通知如下：
一、从事SARS疫苗研究、诊断试剂研制和有关药物筛选等工作的单位，在执行相关技术要求的同时，必须严格按照科学技术部、卫生部、国家食品药品监督管理局和国家环境保护总局四部局联合颁发的《关于印发〈传染性非典型肺炎病毒实验室暂行管理办法〉和〈传染性非典型肺炎病毒的毒种保存、使用和感染动物模型的暂行管理办法〉的通知》（国科发农社字〔2003〕129号）要求保存和使用SARS病毒毒株，任何单位不得擅自进行毒株的转让。因SARS 病
毒毒株保存或者使用不当引起严重后果者，将承担相应的法律责任。
二、各药物研究开发单位应按照《SARS病毒毒株资料登记表》的要求整理有关毒株的详细资料，于2003年7月31日前报中国药品生物制品检定所（北京天坛西里2号，邮编100050；联系人：董关木；联系电话：010-67058428）。未按规定要求提交SARS病毒毒株资料的，国家食品药品监督管理局将不受理其研发制品的注册申报和审批。
三、中国药品生物制品检定所接到各单位报送的SARS病毒毒株资料后，应及时审核并将审核意见和进行药物研究用毒种的基本情况，书面报国家食品药品监督管理局。
四、请各省、自治区、直辖市药品监督管理局尽快将本通知转发至辖区内从事SARS防治药物研究开发单位。
特此通知
附件：1．SARS病毒灭活疫苗临床前研究技术要点
2．细胞模型筛选抗SARS病毒药物试验技术要求
3．SARS诊断试剂生产研制技术要求
4．SARS病毒毒株资料登记表
国家食品药品监督管理局
二○○三年七月一日
附件1：
SARS病毒灭活疫苗临床前研究技术要点
随着对非典型肺炎的病原学、流行病学、诊断和治疗等学科进行全面深入的研究，在各领域已取得重要进展，尤其是确定了SARS病毒为其病原体，已成功分离到多株SARS病毒，并已验证其能在Vero细胞和2BS等细胞系中培养增殖，这为研制疫苗提供了基础和基本条件。但是由于SARS病毒的研究有待进一步深入，疫苗的研制尚存在很多的不确定因素。为使SARS病毒灭活疫苗的临床前研究工作科学规范，特制定SARS病毒灭活疫苗临床前研究考虑要点。
一、毒种
研究本疫苗所用的毒种须证明为SARS病毒，如该毒种分离自人体，须提供以下资料
（一）病毒株名称及来源
1．名称
2．宿主情况：
（1）病人姓名、年龄、性别、民族、家庭住址；
（2）发病地点、发病日期；
（3）收住入院日期、临床确诊日期、实验室确诊日期；
（4）病人病程及病人转归：死亡、痊愈、是否有后遗症；
（5）毒株分离原样本：
咽试子、漱口液、痰液、血液、粪便或尸解标本组织名称；
（6）取样日期；
（7）取样时病人的病期；
（8）取样地点；
（9）病人是否留有恢复期血清；
如有：采血日期（病期）和血清量；
鉴于人类咽试子、漱口液、痰液、粪便等样品难免污染其他外原因子，因此建议尽可能采用病人血液分离的病毒株。
（二）毒株分离过程
1．用细胞分离病毒，须提供所用细胞名称、代次、来源和细胞无菌检测、外原因子检测等资料；鉴于Vero E6细胞的生物学特性，用Vero E6细胞分离的SARS病毒不能直接用于疫苗生产用毒种，须将Vero E6细胞的适应株重新转适应到Vero细胞或二倍体细胞株的毒种方能用于生产，因此建议尽可能使用直接以Vero细胞或二倍体细胞株分离的毒种。
2．通过动物分离病毒，须提供所用动物名称、动物品系、动物级别、动物年龄和制备毒种的动物脏器名称等资料；如再适应到细胞，则还须提供1．项中的6所述的细胞资料。
（三）病毒分离传代特性
样品处理方法、首次盲传确证病毒阳性代次、病毒确证检定方法、每代培养天数、病毒滴度、滴定方法、动物是否发病或死亡等资料。
（四）毒种建立和保存
原始毒种代次、毒种病毒滴度、毒种添加的保护剂的名称和浓度、毒种存储条件。
毒种批的建立应按《中国生物制品规程》疫苗毒种要求进行，应建立原始毒种、主毒种和工作毒种批三级毒种库，主种子和工作种子批还须有毒种的限定代次的资料，以证明主种子和工作种子批在规定代次内的生物学特性与原始毒种一致。
（五）毒种的检定
1．毒种的鉴别试验：
应提供检定方法、检定日期、检定结果等资料，建议采用下述方法进行鉴别试验：
（1）可使用确诊为SARS病人的恢复期高效价血清中和病毒。
（2）测定中和前后的病毒滴度。
（3）应有病毒株的核酸全序列分析的资料，包括序列测定的方案、测定方法和测定结果，测定结果应附核酸序列图、推导的氨基酸序列图、种系发生树图等以进一步证明为SARS冠状病毒。
2．毒种的无菌试验
应根据《中国生物制品规程》疫苗生产用毒种的要求进行无菌试验检查。
3．毒种的外源因子检查
应用证明为SARS病毒感染的单人份病人血清中和本病毒。完全中和病毒后（如不能一次中和，可用另一病人血清再一次中和后）按下列方法进行动物和细胞检查。
（1）动物试验法
小鼠
取15-20g小鼠至少10只，用经中和后的病毒悬液，每只脑内接种0．03ml，腹腔接种0．5ml。至少观察21天。解剖所有在试验24小时后死亡或有患病体征的小鼠，为了检查病毒感染的证据，直接肉眼观察其病理改变，并将有病变的相应的组织悬液通过脑内和腹腔接种另外至少5只小鼠并观察21天。如果没有小鼠表现出病毒感染现象，则病毒种子符合要求。在观察期内至少有80%最初接种的小鼠存活试验才有效。
乳鼠
出生后24小时以内的乳鼠，至少10只，用经中和后的病毒悬液，脑内接种0．01ml，腹腔接种至少0．1ml。每天观察，至少14天。解剖所有在试验24小时后死亡或有患病体征的小鼠，直接肉眼观察其病理改变，并取有病变的相应的组织和脑、脾制备成悬液脑内和腹腔接种另外至少5只小鼠并每天观察，观察14天。如果没有小鼠表现出有病毒感染现象，该病毒种子通过试验。在观察期内至少有80%最初接种的小鼠存活试验才有效。
（2）细胞培养法
·非血吸附病毒检查
中和后的病毒悬液，还应分别接种于人源、猴源和生产用的同种不同批的细胞。如果是利用人二倍体细胞生产的，还应接种另外一株人二倍体细胞。每种细胞最少接种6瓶，每瓶病毒悬液接种量不少于培养液总量的25%。于36±1℃培养，观察二周，或最后一次收获病毒液时间检查是否有CPE出现。未见CPE为阴性。
·血吸附病毒检查
于第6-8天和第14天，每种细胞分别各取出2瓶进行血吸附，一瓶放置2-8℃，一瓶放置20-25℃，30分钟后显微镜下观察，未见血球吸附现象为阴性。
特别注意：鉴于我国实验室条件和所用细胞的不确定因素，用于分离病毒的细胞常常污染支原体，而细胞和病毒一旦污染支原体很难清除，为此，提醒对使用的毒种须高度重视，彻底查清毒种是否确已污染支原体，以免所选毒种不符合生产疫苗用毒种，浪费人力、物力、时间和资源。
4．毒种的病毒滴度
鉴于目前的研究资料显示，SARS病毒在Vero细胞中的复制滴度一般可达108，在二倍体细胞中为106左右，用于疫苗研究的毒种应分别达到上述要求。
5．毒种免疫原性检查
鉴于目前尚无测定疫苗免疫原性的有效方法和标准，建议以实验性灭活疫苗（即用已建立的毒种库制备的灭活病毒液）单次或多次免疫动物后采血清测定中和抗体滴度，测定方法应为蚀斑形成减少法或细胞病变抑制法，可能时应对所测抗体的种类进行分析。用于中和抗体测定的病毒株应为非同源株，免疫用动物可考虑家兔、小鼠、豚鼠或其他敏感动物。如有条件时也可测定疫苗的ED50
6．疫苗候选株病毒的纯化问题
新分离的病毒往往是群体病毒毒种，难免存在不同特性的病毒，如毒种病毒滴度和免疫原性未达要求，必要时可考虑用终末稀释法或蚀斑形成法挑斑反复多次纯化。灭活疫苗的研制，如毒种病毒滴度和免疫原性能达到基本要求，可用现有毒种直接制备实验性疫苗，无须纯化。
7．毒种的其他检定
按《中国生物制品规程》疫苗生产用毒种的要求进行
二、疫苗生产用细胞
鉴于目前SARS病毒对各种细胞的敏感性研究，以Vero E6细胞最好，Vero细胞和二倍体细胞次之。但Vero E6细胞不能用于生产，可选择Vero细胞、和/或二倍体细胞进行研究。
Vero细胞、二倍体细胞均为传代细胞，因此须建立三级细胞库。这两种细胞建立细胞库和各细胞库的各项检定应按《中国生物制品规程》“生物制品生产用动物细胞制备及检定规程”项下的相应要求进行。
Vero细胞是由非洲绿猴肾建立的传代细胞系，至170代以后已有明显的致瘤性，一般使用的疫苗生产终末安全代次为160代以前，建议使用Vero细胞研制疫苗的机构应注意该细胞的资料。
三、生产工艺研究
（一）疫苗原液生产工艺的研究
1．生产工艺的主要技术参数
（1）病毒与细胞的接种比例，MOI的最佳参数。
（2）细胞培养和病毒培养的最佳温度、培养时间和收获时间。
（3）病毒液的收获
鉴于Vero作培养基质时，后续纯化工艺去除细胞DNA时的困难，因此建议不作细胞冻化以提高病毒收获的做法。
（4）灭活或裂解条件及灭活效果的验证
鉴于SARS病毒的强感染和强传播特性，灭活剂的选择和灭活效果的验证尤为重要，建议如下：
·灭活剂
根据其他疫苗的灭活经验，一般情况下可采用甲醛、β-丙内酯或其他有效的灭活剂，如选择甲醛，其浓度、灭活的作用时间、作用温度、pH等条件对疫苗的抗原的活性具有较大的影
响，在研究中应引起注意；
如用β-丙内酯应使用95%以上浓度的新试剂，β-丙内酯保存时间过长引起自身聚合，影响灭活效果。β-丙内酯由于能在疫苗液体中完全水解，不必考虑在成品疫苗中的残留，因此可考虑在纯化前低剂量预灭活一次，提高生产工序时的安全性，在纯化后再灭活一次以确保完全灭活。
·灭活效果的验证
提供病毒灭活验证的详细资料。可采用敏感细胞Vero E6盲传3代，每代用直接免疫荧光验证无活病毒。
（5）病毒液的浓缩和/或活性抗原的提取纯化，可考虑用膜过滤法浓缩和柱层析法或区带离心法纯化或其他有效方法。建议参照其他纯化疫苗的要求，对疫苗的总蛋白含量进行控制。
（6）佐剂
目前能用于疫苗的佐剂仅为铝佐剂，而铝佐剂通常使疫苗产生的抗体滞后，且增加注射局部的副反应机率。如疫苗的抗原量能满足免疫的需要，建议不加佐剂。
2．灭活疫苗的安全性（免疫感染增强作用）
鉴于呼吸道病毒感染的疫苗预防（麻疹病毒、呼吸道合胞病毒等）易产生灭活疫苗导致免疫感染增强的病理反应，因此，本灭活疫苗须排除免疫感染增强作用的潜在危险，为本灭活疫苗的研究、实验和今后的安全使用提供依据。
但是目前没有明确的实验动物模型可以验证有无免疫感染增强作用，为此建议： 可用猴体接种灭活疫苗后再攻击SARS病毒，一定时间后测定猴体是否产生病毒血症、脏器是否减少或无病毒抗原、以及作组织病理学和免疫病理学等检查，可以得到初步的证据。另外也可考虑用家兔、小鼠等别的动物进行免疫感染增强作用的初步验证。
四、生产的安全性问题
鉴于SARS病毒的强传播和强感染性的生物学特性，生产工艺应严格按活病毒和灭活后两部分分开进行，活病毒操作区必须在P3以上生物安全条件下进行，严格执行国家的有关规定。
五、其他
1．按我国《药品注册管理办法》中预防用生物制品的技术要求完成相关的研究。
2．本技术要点将根据对SARS研究的进展情况适时进行修订。
附件2：
细胞模型筛选抗SARS病毒药物试验技术要求
新近发现的非典型肺炎的病原SARS病毒，目前尚没有理想的动物模型可用于对抗SARS病毒药物的筛选。为此用细胞模型筛选研究抗SARS病毒的药物，对评价药物抗病毒活性或效果具有重要提示价值。为规范细胞模型抗SARS病毒药物的筛选研究，制定本技术要求。
本技术要求适用于化药、中药、生物制品等拟用于SARS治疗或预防药物（不包括预防用疫苗），并将根据SARS病毒学研究的进展适时修订。
一、试验材料要求
（一）病毒
1．毒株：应采用SARS流行期临床分离且经相关部门确证的SARS病毒毒株（建议选用2-3株）。
2．毒种库：试验前将病毒先在敏感细胞上传数代，增加毒力，待毒力稳定后，收获病毒分装一定数量的小管，在-80℃低温冰箱或液氮冷冻保存备用。
3．检定：毒种库毒种须经外源因子检测合格后方可用于筛选试验，每次试验取一支，不得回冻再用于筛选。
（二）细胞
1．细胞株：选用对SARS病毒敏感的传代细胞株，如Vero E6、2BS细胞等。
2．细胞库：收集大量培养的细胞分管液氮冻存以保留足够的
传代细胞。试验前先复苏细胞传数代，使培养细胞生长旺盛稳定后，
开始接种细胞培养板进行试验。
3．检定：细胞库细胞须经外源因子检测合格后方可用于筛选试验，每次试验取一支，不得回冻再用于筛选。
（三）待测药物
试验前编号登记、标明药名、来源、批号、重量或体积、溶媒、溶解度、稳定性和保存条件等。
（四）其他
本试验研究必须在生物安全3级试验室进行，毒种的管理使用必须符合国家的有关规定。
二、筛选试验
（一）预备试验
1．病毒毒力测定
选择敏感细胞用于病毒培养，加入10倍系列稀释的5-7个浓度的病毒培养液。适宜条件下培养后每天用倒置显微镜观察细胞病变（CPE）或用MTT染色法观察细胞存活状态，用Reed-Muench法计算病毒半数感染剂量（TCID50），每浓度设4个复孔，重复实验确定毒力。
2．药物对细胞毒性的测定
以细胞病变或MTT染色法为观察指标，前法可观察3-5天，每个药物至少设4个浓度进行测定，用Reed-Muench法求出对细胞无毒的最大浓度（TD0）和半数中毒浓度（TD50）。每浓度药液至少3管，重复试验3次。
（二）筛选试验
经预试验求出病毒的TCID50和药物的TD0后，在SARS病毒的敏感细胞模型上进行抗病毒活性筛选，适宜的培养液及培养条件培养。96孔板，细胞长成单层后，每孔加100μl （100 TCID50左右）病毒感染，吸附2小时后，倾出病毒。然后加入待测药物，只做一个最大无毒浓度（TD0），4个孔。试验设病毒对照、细胞对照及阳性药物对照。以病毒对照孔出现病变达75%以上（即4+时），可终止试验。
倒置显微镜观察对细胞的致病变作用（CPE），将给药孔与病毒对照孔进行比较，如最大无毒浓度药物无抑制病毒CPE作用则不继续做，如有抑制作用须进行补充试验。
（三）补充试验
最大无毒浓度（TD0）的药物如有抗病毒作用，应进行补充筛选试验。模型和培养条件同上。
试验设药物试验组、病毒对照组及细胞对照组。每孔加入100TCID50左右病毒感染，吸附2小时，倾出病毒。选用最大无毒浓度（TD0）药液，2倍或者10倍系列稀释的5-7个浓度，每浓度4孔，每孔100μl，分别加入未感染或感染的细胞培养孔内，每天用倒置显微镜观察，记录细胞病变程度。当病毒对照病孔病变达4+时可终止试验，判定药物的效果。试验须重复3次。
用CPE法，对各组进行比较。
用Reed-Muench法计算半数有效浓度（IC50）及治疗指数（TI）。
TI = 半数中毒浓度（TD50）/半数有效浓度（IC50）
以上初筛及进一步药效评价方法一般是针对治疗性给药（病毒感染细胞后给药）的药物；若为预防性药物，则建议相应调整给药与感染的顺序（病毒感染前给药，病毒感染时及感染后均应洗去药物），以考察其预防效果。
四、结果评价
鉴于目前SARS疾病的理想动物模型尚未建立，且体内外药效学结果的相关性尚不明确，体外药效学的试验结果仅是评价药物疗效重要参考指标。在这种情况下,尽量提供更多的反映药物体内外相关性的研究资料将有助于进一步的评价;如在可能的情况下,进行药代动力学研究,考察体内药物浓度能否达到IC50及维持时间等。另外，还应结合受试药物的安全性，对其有效性进行综合评价。
附件3：
SARS诊断试剂生产研制技术要求
由于对引发严重急性呼吸道综合症（简称SARS）的病原－新型冠状病毒的研究尚有待进一步深入，诊断试剂的研究仍存在很多不确定因素。为规范SARS诊断试剂的研究，特制订本技术要求。
一、基本要求
（一）从事SARS体外生物诊断试剂研发的机构应当具有与试验研究项目相适应的人员、场地及设施等条件。
（二）SARS病毒的分离、管理、使用及其保藏、运输、处理等必须按照国家有关规定执行。
（三）临床研究必须符合GCP的原则及相关的技术要求。
二、原材料
（一）抗体检测试剂
1．抗原：由于对新型冠状病毒的基础研究尚有待深入，为此所用抗原应尽可能选择检测谱广的抗原，如纯化的全病毒抗原。
2．抗原来源明确，质量指标必须达到诊断试剂研制用的
要求。
3．病毒株须经鉴定并确证。
4．其他辅助材料必须符合相关的技术要求。
5．包被用全病毒抗原或阳性质控血清须进行灭活验证研究。
6．阳性质控血清须进行中和试验验证研究。
（二）核酸检测试剂
1．引物的设计须符合核酸检测设计的要求。
2．靶序列需进行与其他病毒同源性的分析对比研究。
3．检测试剂须设定合理的内标和外标。
4．试剂须设置抗污染的特定措施。
5．扩增产物须进行确证研究。
（三）抗原检测试剂
1．可采用单克隆或者多克隆抗体的双抗体检测法。
2．抗体须经特异性交叉反应测定。
三、工艺与生产
（一）工艺过程须进行优化试验研究。
（二）生产人员须经专业知识培训，了解有关SARS的基本知识。
（三）生产车间须符合《药品生产质量管理规范》的要求。
四、质量控制
（一）应制定严格的原材料质量标准要求，保证批与批间的一致性。
（二）应研究制定企业质量标准及参考品，用于对试剂的质量控制。
（三）试剂盒须进行成品性能的评价。
五、临床研究
（一）研究用样品必须有明确、详细的临床资料，包括病程等；样品中须有一定数量的阳转系列标本。
（二）须经过至少两家临床研究单位进行临床考核，出具临床考核报告并加盖临床考核单位有效公章。
（三）研究用试剂须经中国药品生物制品检定所检定合格后方可用于临床研究。
（四）检测时应采用双盲或者单盲，阴性样品和阳性样品须在符合相关规定的检测实验室的实际评价条件下同时进行测定。
（五）核酸检测试剂标本如血清或者唾液等，阳性数量分别不少于200份，同一类型阴性样品不少于400份。
（六）对酶联免疫诊断试剂，不同类型的阳性、阴性样品均不少于400份。
（七）其他方法的SARS诊断试剂，不同类型的阳性、阴性样品的数量均不得少于300份。
（八）检测数据的统计学分析，以病程10天划分，不同病程的病例（样本）数应具有统计学意义。
六、其他
（一）SARS诊断试剂的生产研制必须符合《中华人民共和国传染病防治法》的相关要求。
（二）产品使用说明书需明确标注试剂检测的局限性。
（三）本技术要求将根据对SARS研究的进展情况适时进行修订。
附件4：
SARS病毒毒株资料登记表
一、病毒株名称：
二、宿主情况：
- 病人姓名
- 病人年龄
- 病人性别
- 病人民族
- 病人家庭住址
- 发病地点
- 发病日期
- 收住入院日期
- 临床确诊日期
- 实验室确诊日期
- 病人病程
- 病人转归 死亡 痊愈 是否有后遗症
- 病人密切接触者病人数
- 毒株分离原样本：
咽试子 漱口液 痰液 血液 粪便 尸解标本的组织名称
- 取样日期
- 取样时病人的病期
- 取样地点
- 病人是否留有恢复期血清
如有：采血日期
血清量 ml 支
三、毒株分离过程
分离用细胞
细胞名称
细胞代次
细胞来源
培养基名称
分离用动物
动物名称
动物品系
动物年龄
饲养条件
病毒分离传代
样品处理方法
首次盲传确证病毒阳性代次
病毒确证检定方法
每代培养天数
细胞是否产生病变
病变模式（如有请提供照片）
病毒滴度
滴定方法
四、毒种建立和保存
毒种存储条件 -20℃ -40℃ -60℃ -80℃
原始毒种代次
分装毒种用容器名称
分装毒种用容器材料
分装毒种用容器体积
毒种病毒滴度
毒种添加的保护剂
人白蛋白 %
牛血清 %
其他保护剂
原始毒种批数量 ml 支
该株毒种的其他代次
数量 ml 支
如已冻干
写明冻干条件
五、毒种的检定
毒种的鉴别实验
检定方法
检定日期
检定结果
毒种的无菌试验
检定方法
检定日期
检定结果
毒种的序列测定
测定方案
测定方法
测定日期
实验室名称
测定结果 附：核酸序列图
推导的氨基酸序列图
种系发生树图
六、分离病毒的P3实验室
面积
所在地址
邮政编码
电话
传真
实验室负责人姓名 职称 职务
E-mail：
手机
上级主管部门
负责人（签章）